qpcr内参ct值不齐,做qpcr内参ct值25正常吗

内参ct值29能用吗 2023-08-11 21:40 533 墨鱼

内参ct值29能用吗

qpcr内参ct值不齐,做qpcr内参ct值25正常吗

差异肯定是有的，但ct相差5个ct有点大了；你用的是什么仪器测的rna浓度？另外另外是否电泳检测过rna的小鼠样本，qPCR试过actin、18s,第一批actin是差不多的(Cq值都在15左右),18s不齐(Max和min查2个Cq左右);第二批都不行啦。这是为什么呀？ RNA浓度，A260/A280、A230/A280都没问题。

QPCR内参ct不齐，目的基因ct齐苦逼求毕业楼主关注都是1000ng的rna逆转录获得cdna,稀释十倍跑的q。但是所有的目的基因ct值都很均一，内参反而差距很大，最后导一、扩增曲线正常，CT值偏大或偏小从CT值表达公式中我们可以看出初始模板的质量和扩增效率，会直接影响到CT值的大小。如果扩增起始模板量浓度高或引物设计不合适那么所用的循环数就

1.内参不齐(个别cDNA的样本与其他cDNA的样本内参CT值差异在2个循环以上),可将CT值差异较大的cDNA做不同梯度的倍比稀释进行qPCR,选择CT值差异小于2个循环的cDNA稀释倍数进行实验。一Ct值与起始模板量的关系：模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。起始模板量浓度越高，Ct值越小；起始模板量浓度越低，Ct值越大。2.扩增曲线、荧光阈值与一定产物量qPCR扩增产物量是以

≡(▔﹏▔)≡ 只要rna质量够，体积不是问题，你内参差多少？幼稚收缩蛋白差了两个循环，但是两个内参结果不太一样赞回应幼稚收缩蛋白2023-02-09 15:30:16 江苏差了两个将qPCR 产物进行原液、1/10、1/100 梯度稀释，每个梯度设置三个复孔，进行qPCR 扩增，复孔间CT值取平均值，得到三组CT值。标准曲线绘制及扩增效率计算：可以在excel 上进行扩增效率

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