qpcr结果重复,如何处理qpcr数据

qpcr结果重复,如何处理qpcr数据

qPCR结果异常原因分析及解决方案一、CT值异常1.复孔间CT差异大1.1.Ct≥30,复孔的重复性差属于正常现象。原因：在模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性而直接导致复孔qPCR就提取一次，检测三次就好了。一般相对定量还有两个内参，内参就能消除提取误差jurkat.1640 3次提取RNA,是生物学重复；加样的时候至少平行加3孔，如果有1孔

qPCR结果变化，也就是重复性不好，也即精度差的问题，是由很多因素导致的，包括温度、浓度、操作等都会影响。qPCR精度的一般随着拷贝数减少而变得更不可控。理想的这个需要定期校准定量PCR仪③ qPCR预混液未混合均匀使用前应充分混匀qPCR预混液注：重复性较为理想的扩增曲线STD<0.2 2.熔解曲线为非单一峰这个可能的原因有以下几点：① 非特异性扩增可以根

∪▂∪ 解决方案：除了要关注qPCR 实验生物学重复性，做好样品处理与质量控制，也要注意qPCR 实验常会存在批次效应，复孔重复性差，大多因为加样误差导致，建议移液器定期校准，同时可通过扩大qPCR作为分子生物学研究的常规方法之一，每年有大量基于qPCR的数据发表。然而时至今日，实验过程中仍然经常存在很多不规范的现象，从而导致qPCR结果重复性差、可信度较低、结果参差不

对于你的结果你可以从以下几个方面分析：1、你分开2次提的RNA逆转时逆转量是否一致2、你的实验内参CT值做的好不好3、加样的误差有没有4、有没有做生物性重复，一次准确的qPCR 数据，可能会来自多次试验验证，我们在进行多次实验的时候，常出现批次效应，重复性差等情况。很多科研人会觉得是cDNA 降解或者污染了，其实可能是反应体系的问题，其中

师姐，你的qPCR 结果我重复不出来，结果误差太大，到底哪有问题呀？仪器工程师刚调试过，可以排除。不会是因为基因丰度或模板量低，这批样品我自己之前包括昨天做了都没有问题，你操作过◆选用灵敏度高的反转录和qPCR试剂，针对低丰度模板能够得到高效特异的扩增。了解了以上内容，相信下次遇到重复性差的问题，我们就可以根据问题逐一排查了。为了得到重复性高的实验结