qPCR基线不平,pcr基线不稳的原因有哪些

qPCR基线不平,pcr基线不稳的原因有哪些

＋▂＋ 体外诊断qPCR引物及探针NGS引物大规模Oligo合成预设计成品引物RNA合成化学合成siRNA服务化学合成miRNA服务体外转录服务基因合成全基因合成基因相关服务质粒制备服务一代测序服务CE 4.最好使用Rox校准。如果使用的试剂不含Rox,需要将参比染料选成None。扩增曲线杂乱无规律【可能原因】Rox浓度和机型不匹配【解决方案】可以在仪器上将参比染料设置由ROX更

液相色谱基线不稳的话原因有以下几种及解决方法：1、柱温波动。即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外2. 基线不平结果：扩增曲线基线期下滑。可能原因：基线范围设置不当。建议：重新手动设置基线。3. 荧光信号采集异常结果：扩增曲线异常，呈现锯齿状(或有熔解

ˋ＾ˊ 基线不平滑，整体扩增信号杂乱，感觉整个扩增效果有点被抑制的情况。02 分析：从整体来看整板扩增效果不是特别理想，然而进行样本单独分析时，发现问题仅出现在几个标本身上，这几个标比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴

若核酸完整，则峰图基线平整；若核酸降解严重，则基线不平并出现较多降解峰；RIN数值大小即反映RNA的完整性，在0-10区间范围内，数值越大表明RNA质量越好、完整度越高。小V悄悄告诉你，如1、模板量过高导致，建议减小基线的终点值(一般建议设置为Ct值-4)。2、RNA纯度低，建议梯度加大模板稀释倍数看优化效果或重新制备高纯度RNA重新实验。

╯＾╰〉 1. Real-time qPCR常见参数基线(baseline) 通常是3-15个循环的荧光信号同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线阈值(threshold) 自动设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍可能是基线范围设置不当，这种一般是由于模板量过高导致的。建议减小基线的终点值(一般建议设置为Ct值-4),调整后见下图。4.扩增曲线平台期锯齿状1)RNA纯度低，建议梯度加大模板稀释