PCR荧光曲线平台期下滑,荧光定量PCR没有扩增曲线

PCR荧光曲线平台期下滑,荧光定量PCR没有扩增曲线

则会造成耗材压扁，甚至造成机器故障；如果0.2ml加热模块用成0.1ml耗材，则会造成反应管的外壁和荧光定量PCR仪器的温控模块没有充分接触，从而出现热传导不充分，进而影响酶的活性，会引结果：扩增曲线基线期下滑。可能原因：基线范围设置不当。建议：重新手动设置基线。3. 荧光信号采集异常结果：扩增曲线异常，呈现锯齿状(或有熔解曲线无扩增曲线)。可能原因：荧光

1、扩增曲线从起始位置至结束，呈现S形状，表示正确。2、扩增曲线不在起始位置且呈现递增向上曲线，表示仪器使用过度，导致荧光收集不稳定异常曲线2:PCR扩增抑制原因分析：H07存在扩增抑制解决方案：将样本稀释后进行扩增(抑制物的影响可通过稀释样本消除) 异常曲线3:扩增曲线断裂或

图一出现荧光强度下降的情况可能是加样管里出现气泡，气泡破裂导致荧光下降，或者仪器问题结合图二曲线不解决方法：增加循环数，一般设置到40即可；检查qPCR反应程序，添加荧光信号采集步骤；可能为目的基因的含量低导致，可用高浓度的上样量进行试验，或者重新提取模板进

二、常见问题分析4、“可疑的”扩增曲线(以ABI7500为例) 由于PCR扩增形成的真正的扩增曲线通常很容易确认。有特征的形状：首先有背景信号(基线期),然后是三PCR扩增曲线扩增曲线的横坐标代表扩增循环系数(Cycle),纵坐标代表荧光强度。正常的扩增曲线是比较平滑的S型曲线。典型的扩增曲线分为基线期、指数增长期、线性