pcr扩增曲线异常的原因,pcr扩增曲线结果图怎么看

pcr扩增曲线异常的原因,pcr扩增曲线结果图怎么看

(ˉ▽ˉ；) 5.扩增曲线异常，如“S”型曲线1)反应体系引起的扩增曲线不光滑---扩增效率偏差(过高或过低) A. 扩增效率过高出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量一、扩增信号太弱，经系统矫正后，就会产生不平滑的线，可以通过提高模板浓度重复实验。二、仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器出现波动或者检测孔本身出现异常。2)扩增曲线断裂

(1)稀释模板，重新扩增。2)检查试剂，更换新试剂，双试剂检测。7.扩增曲线前边下降，后边正常原因分析：(1)PCR前期过程中，试剂和模板没有得到充分的混匀，导致②质控品原因：不同品牌的质控品导致扩增片段不同，同一品牌不同批号的质控品混用导致扩增片段存在批间差异，质控品保存不当造成降解等。解决方案：①首先确认所使用的质控品是第三方

如果操作不规范，可能会导致扩增曲线异常。例如，样品处理不彻底、反应体系中试剂加入量不准确、PCR程序设置错误等。1.2 污染qPCR实验中，污染是一个常见的问题。污染可能来自2.3.2常见原因：样本中可能存在干扰物质、提取纯化不完全、PCR仪热盖出现异常等。2.3.3解决方案：复测；重新提取，或使用不同试剂盒提取。2.4案例4 2.4.1现象：不规则的扩增曲线(见下图

异常曲线1:PCR扩增抑制原因分析：H07存在扩增抑制解决方案：将样本稀释后进行扩增(抑制物的影响可通过稀释样本消除)异常曲线2:自动基线设置问题原因分析：自动基线问题解耗材对于荧光定量PCR来说比较重要，很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括：1)错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差，会造

≥▽≤ 耗材对于荧光定量PCR来说比较重要，很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括：1)错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差，会造常见异常曲线原因对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有ROX来作为参比荧光染料。