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dna提取基本步骤 |
pcr扩增,PCR扩增技术
pcr扩增,聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个PCR是聚合酶链式反应的简称,指在引物指导下由酶催化的对特定模板(克隆或基因组DNA)的扩增反应,是模拟体内DNA复制过程,在体外特异性扩增DNA片段的一种技术,在分子生物学中有广泛的
标准的PCR操作程序是将PCR必需反应成份分别加入一微量离心管中,然后置于一定的循环参数条件下进行循环扩增。具体如下:1、向一微量离心管中依次加入DNA模板 102-105拷贝引物 各PCR扩增反应由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成︰①模板DNA的变性︰模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链解链,方便引物DNA结合于其上;②模板DNA 与引物的退
1.初始化步骤。这仅对热启动PCR 必不可少。此步骤将溶液加热至94-98°C,以激活DNA 聚合酶。该步骤的时间取决于所使用的聚合酶。2.变性步骤。DNA是双链分子,DNA扩增需要引物与③纯化的DNA,由于去除了抑制PCR反应的杂质,可提高扩增成功率。PCR 反应所需DNA模板的量极微,依DNA的性质而定,不到1 μg 的基因组DNA序列,就足以进行PCR分析;对于质粒克隆的DNA,一
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