荧光定量pcr溶解曲线没有峰,荧光定量pcr的△rn很低

荧光定量pcr没有溶解曲线 2023-06-04 19:26 616 墨鱼

荧光定量pcr没有溶解曲线

荧光定量pcr溶解曲线没有峰,荧光定量pcr的△rn很低

荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber曾遇过这种情况，熔解曲线没有峰，虽然有扩增曲线和ct，但数据不可靠，后检查原因是模板和引物问题，换

如果0.2ml加热模块用成0.1ml耗材，则会造成反应管的外壁和荧光定量pcr仪器的温控模块没有充分接触，从而出现热传导不充分，进而影响酶的活性，会引起重复性不好(可能是熔解程序设置错误，未搜集荧光信号，建议重新实验，增加熔解曲线阶段的信号搜集。5.熔解曲线峰型杂乱1)反应体系污染，结合NTC和NRC结果确认污染情况，建议从水，引物，酶和环境等逐

较低峰出现在右侧：问题分析：大片段的非特异性扩增解决方法：重新设计引物；双峰不明显：问题分析：PCR产物目的序列中GC含量不均一造成的同一产物解离稍有偏差造成，虽然扩增产物特异你的扩增曲线是什么样子的？用的是染料法吗？感觉你引物的特异性不是很好，Tm值是多少？我们一般优化峰型

∪▂∪ 荧光定量pcr溶解曲线没有峰是因为：一般每加温一度，读一次信号，当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多，曲线的横坐标是温度，纵坐标是荧光信号的变化，开始加溶解曲线没有明显的峰说明没有扩增产物，这里面问题很多，比如温度条件、引物条件等等，最好还是能够找

一、荧光定量PCR异常扩增曲线常见问题qPCR虽然简单，但是难免会出现一些小问题，接下来就谈谈可能会出现哪些问题，以及这些问题该如何解决：(一)无Ct值出现1比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴下来啦～这种情况大家

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