pcr扩增条带长度,引物扩增的pcr产物长度

pcr扩增条带长度,引物扩增的pcr产物长度

Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。4、反应体积的改变：通常PCR PCR扩增序列长度和设计引物长度没有太多必然联系(用15bp引物扩增9K+的序列也没有任何问题),使Tm值一定小于72°C,引物至少保持在12bp以上(如果你不放心，可以用NCBI的序列

这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段，所以长度不一，这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式(alterna太长了引物分子不稳定，容易断裂导致扩增效率下降，同时序列过长容易出现重复序列，容易出现引物二聚体。

不建议使用超过45个循环，因为过多的循环数会产生非特异性条带。而且，副产物的累积和反应组分的消耗会大大降低PCR效率，使PCR扩增曲线出现平台期(图7)。相反，较少的循环数更适合于无偏倚扩增(如下每分钟可延伸1Kb 的长度，常规PCR一般为25—40 个循环，若循环加长，则由于酶各类PCR扩增仪程序设定各不相同，编程过程视扩增的DNA 片段的要求及仪器而定

＋▂＋ 3.退火温度过低，PCR循环数偏多。4.模板DNA用量过大或模板DNA不纯。5.引物特异性差、引物间形成二聚体导致非特异性扩增。知道了问题的出现原因，就能有效的针对并改变PCR条件，跑模板DNA 质量差，PCR 条件不合适等。4. 非特异性扩增：有时候，你可能会看到预期条带之外的其他条带。这些可能是由于非特异性扩增（你的引物扩增了不应该扩增的

引物的长度：一般以18~30bq为宜，以20bq左右的较为常用。引物过短，易导致非特异扩增。引物较长的话其特异性虽好，但也易引起二级结构。引物的G+C的比例和碱基：G+C含量需适宜，在40%~60%使用Genesand 2×I-5高保真PCR Mix和该程序成功扩增5kb长度的片段，部分序列AT含量在80%以上注意：上述程序仅供学习和参考，具体实验应具体分析。PCR扩增常见问题及解决办法Q1:PCR