植物rna干扰载体,rna干扰技术及其应用

植物rna干扰载体,rna干扰技术及其应用

RNA 干扰(RNA interference, RNAi)技术，是将与内源mRNA 编码区同源的小片段(19~23 bp)外源双链RNA(siRNA)导入细胞中，引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解，从而导致特定基因表1. rna干扰载体构建引物(primer),又名引子。是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多

介导RNA干扰效应的方法包括化学合成的双链小干扰RNA(siRNA)、基于载体的短发夹RNA(shRNA)等。虽然siRNA和shRNA可以实现相似的功能结果，但本质上是不同的分子，RNA干扰就是小片段单链RNA对转录后mRNA的降解导致基因沉默的效应。与体内某一基因相同的DNA序列可特异性抑制细胞内靶标基因的表达，这种现象称之为DNA干扰(DNA

＋▽＋ 在RNAi研究中，通常通过向细胞内导入发夹RNA（hairpin RNA，hpRNA）来引起干扰，即在构建植物转基因的双元载体时，通过强启动子驱动一个“正向序列一环一互补序列”的转录单元进行本研究拟克隆同时与致病疫霉4个纤维素合酶基因同源的融合片段C1234, 转化ihpRNA载体至易感马铃薯品种大西洋，观察检测转基因植株叶片接种病原菌后的发病情况，以期探索植物介导的RNAi能否干扰致病

＞０＜ Lawrence等曾用拟南芥着丝点甲基化相关的dsRNA,对拟南芥的四倍体进行RNA干扰，发现拟南芥的四倍体中对应的与甲基化有关的mRNA含量水平剧减。这些都可以证明R最早的交叉保护现象就是科学家在植物与病毒的互作中发现的，植物病毒病病会降低作物的质量和数量，在世界范围内造成巨大的经济损失，而基于RNA干扰(RNA interference, RNAi)的抗病毒

因为逆转录病毒载体可以在感染细胞的染色体上稳定的重组目的基因，所以使用载体转染方法获得长期稳定的RNA干扰作用是非常有效的。pSINsi载体系列是以自我复制缺其沉默效率比hpRNA高达90%以上。4.2 启动子的强弱启动子强弱对于外源基因的表达水平有重要的影响。CaMV 35S 启动子已广泛应用于双子叶植物中，但在水稻、小麦等禾本科植物中可用泛