如果引物量不够会扩增,pcr体系中模板的量

pcr扩增引物数目计算 2023-10-16 17:45 451 墨鱼

pcr扩增引物数目计算

如果引物量不够会扩增,pcr体系中模板的量

第一次(用的旧目的基因A引物，后期证明不行)目的基因A引物浓度：10um逆转录：RNA浓度250-500ug\ul,加入3ul扩增；扩增：cDna加入1ul,管家基因及其他基因均出结果，管家基因CT值在14-15之间引物一般是数量级上过量的，影响不大。

(2) DNA模板量太少。增加DNA模板量。3) PCR循环数不足。增加反应循环数。4) 引物量不足。增加体系中引物含量。5) 延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。6) 变性时在引物设计时，需要对引物进行Blast，确保其特异性。扩增效率：引物一般反应浓度在0.2 μmol/L。建议把引物稀释成10 uM，20 μl的PCR体系一般加0.5-1.0 μl的引物

PCR反应中引物的量也影响PCR扩增效果，当PCR引物量太低，则产物量降低，会出现假阴性。引物浓度过高会促进引物的错误引导非特异产物合成，还会增加引物二聚体的形成③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓

你的上下游引物短到只有1bp，假设是T，那么模板中所有的A都能跟它配对，并据此开始链合成。所以引物其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引物。减低酶量或

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