pcr出现复孔扩增曲线不一致,qPCR实验原理

PCR技术简介 2023-08-26 13:05 610 墨鱼

PCR技术简介

pcr出现复孔扩增曲线不一致,qPCR实验原理

(1)扩增曲线不光滑主要有两个原因：一是扩增信号太弱，经系统矫正后，就产生这样抖啊抖的线，小编建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题，可能在扩指数扩增期是指PCR产物的量增长最快的一个时期，理想条件下，是呈指数增长的，在这个时期由于样品间的细小误差尚未放大，所以复孔的荧光信号在这个时期相对一致。通常荧光阈值需要设置

(1)扩增曲线不光滑主要有两个原因：一是扩增信号太弱，经系统矫正后，就产生这样抖啊抖的线，小编建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器出扩增曲线，是描述PCR动态进程的曲线即扩增曲线PCR的扩增曲线实际上并不是一条标准的指数曲线，而是S形曲线。这是因为随着PCR循环数的增加，DNA聚合酶的失活、dNTP和引物的枯竭、反应副

╯＾╰〉主要有两个原因：一是扩增信号太弱，经系统矫正后产生斜线，二是仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器出现了波动或者本身该检测孔出现了异常。2)扩增曲线断裂或荧光定量PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外，qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况：1. 复孔间重复性差怎么办？复孔间重复性差一般会有以下两种

定量PCR数据常见问题分析一、扩增信号太弱，经系统矫正后，就会产生不平滑的线，可以通过提高模板浓度重复实验。二、仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器出现波动或者检测孔本身出现异常。2)扩增曲线断裂

⊙﹏⊙‖∣° 9. 标准曲线线性关系不佳可能原因：加样误差；标准品降解；模板浓度高或有抑制物；引物或探针不佳；PCR 酶灵敏度不高及活力下降。解决方案：标准品加样体积大于2ul、引物预混后再分复阈值线一、数据分析二、常见问题分析1、PCR扩增抑制（以Bio-CFX96为例）扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。H07存在扩增抑制；解决方法：将样本稀释后进行扩增。（抑制物的影响可

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