PCR异常溶解曲线解析,pcr没有溶解曲线

PCR异常溶解曲线解析,pcr没有溶解曲线

（2）如果只是想看看扩增效率（E）（E=10-1/斜率），检验PCR的反应体系是否符合要求，我们有时候也采用待测试样品作为标准品，逐步稀释后进行反应，最终看标准曲线的斜率和R2是否符则会造成耗材压扁，甚至造成机器故障；如果0.2ml加热模块用成0.1ml耗材，则会造成反应管的外壁和荧光定量PCR仪器的温控模块没有充分接触，从而出现热传导不充分，进

耗材对于荧光定量PCR 来说比较重要，很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括：1)错误使用成普通PCR 仪器所对应的耗材普通PCR 可能会引起标准曲线扩增效率或者R2值异常；从冰箱冷冻中取出的试剂是否有混匀，如果试剂融化后没有混匀，这时候取出的试剂不是均一的，会影响后面的扩增；定量PCR预混液跟核酸模板加好后

∪０∪ - PCR各反应成分的降解或加样量不足- 扩增片段太长：建议长度80-200bp◆ 基因表达量低：若重新反复设计引物仍不能解决问题，可以放弃该基因或使用其他更为灵敏的检测方法扩增曲融解曲线是PCR反应结束后，将反应液的温度逐渐升高，实时监测荧光染料的荧光信号轻度变化进行的。升温前PCR产物成双链结构，具有较高的荧光强度信号，当逐渐升高温度的同时，DNA双链逐渐

(｀▽′) 对于荧光定量PCR的结果的判断，最直观的判断就是看扩增曲线是否正常。很多老师会遇到异常扩增曲线的困扰，接下来我们会结合几个实例，带着大家一起来看一下常见的异常扩增曲线的很可能是dimer，而不是你的目的产物。如果你相同样品各管的溶解曲线都只有一个尖锐的峰，而且不是dimer，说明你的扩增的产物是稳定正确的，数据可以采用。它只是反