荧光定量中空白的CT值很大,qpcr内参ct值相差太大

荧光定量中空白的CT值很大,qpcr内参ct值相差太大

空白对照组NUTD组mRNA相对于空白对照组mRNA的表达水平2-CTNUTD组-空白对照组谢谢编辑老师62-CT对就是荧光定量PCR数据处理的结果值7原图45表达内容与表3是否重复另柱状图横纵坐标比1、阈值循环数(Cycle threshold,Ct值)的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。Ct值与模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始模板浓度越高，Ct值越小；起始

小弟最近在做荧光定量PCR,发现无论是actin还是目的基因的CT值都很高(30多),目的基因30多也就罢了，actin不会这么高啊！我先后做过以下调整：1、增加模板浓度，稀释10倍、5倍、2Ct值：是指QPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的扩增循环数(cycle threshold);也可以理解为起始模板扩增达到一定产无量时所对应的循环数；是荧光定

1. Ct 值的定义在荧光定量PCR 技术中，有一个很重要的概念——Ct 值。C 代表Cycle,t 代表threshold,Ct 值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循Ct值的范围为15-35。Ct值小于15,认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%

我这里用了不同的cDNA模板和相同的引物，CT值在20-31之间，熔解曲线都是单峰，最后结果算出来也是符合预期的。这里也有要注意的地方，不同公司的试剂的荧光强度天生就不一样，一起跑就会CT值的定义是PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。重复实验中可以直观地看到，尽管平台期DNA拷贝数波动很大，CT值却是相对固定的。如果用不

╯０╰ 1、最有可能是RNA降解严重，按你的ct值来看，可能10%的RNA都降解了。建议电泳看看RNA是不是降解比较严什么是CT值？在荧光定量PCR扩增实验中，当扩增产物的荧光信号(Fluorescence signal)达到设定的荧光阈值(FLUORESCENCE threshold)时的所对应的扩增循环数(Cycle