pcr扩增模板都还在,pcr扩增过程

pcr模版的选择 2023-10-14 13:39 691 墨鱼

pcr模版的选择

pcr扩增模板都还在,pcr扩增过程

这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！找问题要从大到小：1、PCR扩增体系问题用其他聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学的基础实验技术之一，但如果忽略了其中的一些要点，即使是实验室里的大神，也会遇到目的序列扩增不出的情况。PCR 的成功与否与模板、引物、DNA 聚合酶

?▽? 模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer，可以有效降低解链温度；模板为粗品，有PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备②

增加DNA模板量。PCR循环数不足。增加反应循环数。引物量不足。增加体系中引物含量。延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶因为pcr利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。DNA模板纯度不纯的时候，会对PCR起抑制作用。PCR反应

出现这种如果扩增模板浓度是正常的，那么多数原因可能是由于系统界面参数设置错误所导致的。如果参与扩增的模板并非所有的孔，而系统界面在所有的(C-H行)都默按照你的酶的说明书来加pcr模板的量，加多了，会产生非特异性结合，产物条带多，且不特异。丁香清香2022-06-06 有帮助样本量多会导致扩增速度会快一些，产量大，但是有可能产生

重新制备cDNA模板即可3.Ct值出现过晚① PCR产物太长PCR产物不宜太长，一般100-50bp即可② cDNA模板降解重新制备模板，重复实验③ 扩增效率极低优化反应条件，尝试三步法扩增程真核生物DNA里边是有非基因序列的，如果你不想要这些非基因序列，就用mRNA做模板，然后做反转录，得到cDNA, 再用PCR扩增(设计引物时要根据cDNA序列),得到的产物中间应该是不会有非基因

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标签： pcr扩增过程