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PCR引物合成技术介绍 2023-10-06 20:00 263 墨鱼

PCR引物合成技术介绍

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⊙▽⊙ 1⃣️寻找靶序列1-进入BCBI官网(百度直接搜索🔍,注意广告)—点击gene-基因名称-查找2找到mRNA序列(NA) 3找到CDS 复制2⃣️引物设计1-回到官网首页- BLAST- primerBLAST 2-粘贴PCR反应中是从引物的3‘端开始合成新DNA链的。所以新合成的DNA链中，原来的引物在5‘端，新加入的碱基在3‘端。引物3’端为关键碱基，是PCR延伸的起始端，不能进

PCR引物浓度一般选5～20μmol/L。PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和引物自身和引物间不能存在互补。引物3’末端为G或C; 6)避免DNA污染，跨外显子接头区；7)至少设计2-3对引物，预实验筛选最佳引物；8)将所有设计的引物在NCBI数据库中比对以确定它们对靶基因特异性。

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•PCR 产物长度；real-time PCR要求在300bp以内，一般首选80-150bp 之间；•多对目的基因同时扩增，文献上查来的引物条件会不同，需要设计尽可能条件一致的引物；•目的基因含量比较低时，需要设计灵同样，还可使用Primer3来设计用于PCR-ELISA的杂交探针和其他基于探针的PCR引物设计。2.NCBI 网址：https:

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