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荧光定量pcr扩增曲线 |
荧光定量pcr扩增曲线翘尾,PCR结果翘尾现象
异常曲线1:扩增曲线不光滑原因分析:PCR反应管没有盖紧,反应液泄露PCR反应液有挂壁仪器未经过校正(包括自动校正或ROX校正)体系中抑制物较多,导致荧光不稳定仪器使用过度,导致荧2.1.2 常见原因:阴性质控曲线翘尾,存在阳性质控或阳性标本污染;样本曲线翘尾,表示目的基因浓度低或者存在非特异性扩增或者存在污染。2.1.3解决方案:首先排除是否存在污染;排除污染
一般都是微量蒸发导致的。解决方法:可以通过溶解曲线来判断是污染还是引物二聚体,如果是探针法实时荧光定量PCR实验,则可能是污染导致的起跳。多个标本出现单靶标通道的扩增曲线翘尾。【原因分析】a) 反应液配制后保存不当,如荧光探针断裂。b) 存在阳性质控污染或者其他荧光物质污染。c) 扩增试剂/耗材的批间差异导致非
答:在PCR扩增过程中会出现两种翘尾情况,一种是阴性对照出现翘尾,基本可以判定为阳性质控或者阳性样本污染导致;另外一种是样品出现翘尾。如果样品呈现翘尾现象,①排除是否存在污染然后重新提取样本,如果复检后扩增曲线是阴性直线则说明之前的翘尾是非特异性扩增或存在污染;如果复检后扩增曲线与之前的翘尾保持一致说明样本中含有较低的病毒浓
●△● (1)阴参曲线末尾起跳,通常表示存在污染;(2)复检样本,排除非特异性扩增的可能性;(3)正常样本分析其原因是:气泡在PCR 反应的过程中被加热,在某个时刻破裂,此时出现荧光扰动,在这个循环检测到的荧光型号和上一个循环不一样,此时如果波动位于基线期很可能就被软件识别为开始扩增的拐点,扩增
末尾起跳原因:(1)阴参曲线末尾起跳,通常表示存在污染;(2)复检样本,排除非特异性扩增的可能性;(3)正常样本也可存在曲线末尾起跳,表示样本浓度低或者加2.1.2 常见原因:阴性质控曲线翘尾,存在阳性质控或阳性标本污染;样本曲线翘尾,表示目的基因浓度低或者存在非特异性扩增或者存在污染。2.1.3解决方案:首先排除是否存在污染;排除污染
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标签: PCR结果翘尾现象
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