探针设计原则,探针的作用

探针法对探针有什么要求 2023-10-07 10:02 867 墨鱼

探针法对探针有什么要求

探针设计原则,探针的作用

总体原则先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近探针。所选序列应该高度特异，尽量选择具有最小二级结构的扩增片段——这是因为二级结构会影响反应效率，而C比G多的探针效果更好，如果C少于G,选择其互补链•多态位点应尽量位于探针中央，可以±3个碱基6 基因表达探针RQ TaqMan探针3' Exon 1 Exon 2 Exon 3 基因表达，cDNA定量研

探针设计的基本原则：1.保守：探针要绝对的保守，有时分型就单独依靠探针来决定。理论上有一个碱基不配对，就可能检测不出来。若找不到完全保守的片段，也只能选取有一个碱基不同比如MGB探针如果15个碱基就能达到对应的Tm值，普通探针需要25个，那探针中单个碱基的变化，在MGB探针中就是1/15的温度差，而普通探针则是1/25。MGB探针对于SNP检测的敏感度就更高了……

文献中很难找到关于RNA探针设计的原则，有的文献报道直接用cDNA合成RNA探针。借鉴爪蟾中原位杂交探针设计流程，以小鼠FGF10的探针设计为例进行介绍。在NCBI引物探针设计最主要的不是设计，而是引物探针的评估。引物探针评估的时候反而这些原则才有用场。所以大家不要用反了顺序。这段话是经验之谈，仅供参考) 首先blast是否特异，然后评估T

探针设计原则1.探针位置尽可能地靠近上游引物扩增片段长度在50 150bp 范围内2.探针长度通常在20 30bp Tm 值在65 70℃ 通常比引物Tm 高5 10℃ 3 GC 含探针的设计原则系统标签：探针荧光taqman基团mgb设计实时荧光Taqman探针设计的几个要点实验室很多同学都要做RealtimePCR实验，实验室的师兄师姐都会冇很多宝

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