PCR扩增ct,PCR扩增的目的

PCR扩增ct,PCR扩增的目的

荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念基线(Baseline):是指在PCR扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大。接近一条直线，这样的直线即是基线。PCR扩增中CT值的意义在PCR扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大，接近一条直线，这样的直线即是基线，这条线是可以自动生成也可以手动设置的。之后反应会进入指数增长期，这个

∪△∪ CT(阈值循环，Threshold Cycle)是扩增曲线和阈值线的交叉点(图1B)。它是PCR反应中模板浓度的相对测量。除了模板浓度外，还有许多因素会影响CT的绝对值。我们将要因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放

Ct值：是指QPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的扩增循环数(cycle threshold);也可以理解为起始模板扩增达到一定产无量时所对应的循标准曲线制作：利用Mean Ct (平均值)作图可得到标准曲线y = -3.29x + 40.33;纵坐标y就是Ct值，横坐标x就是样本浓度的数量级，3.29是斜率Slope,当扩增效率为100%时斜率为-3.32。R2 =

Ct值的设定是通过设定荧光阈值来实现的。在PCR扩增过程中，荧光信号随着扩增产物的积累而增加。当荧光信号从CT值表达公式中我们可以看出初始模板的质量和扩增效率，会直接影响到CT值的大小。如果扩增起始模板量浓度高或引物设计不合适那么所用的循环数就会小，即出现

6. 物理原因：变性对PCR 扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降即，起始模板量=PCR扩增产物量×2^(-Ct)。当PCR扩增产物量达到同一水平时对应的Ct值不同，其原因在于起始模板量不同；而当样本和内参基因的PCR扩增产物量相同时，如果要算出它们对应起始模板量的比值