pcr反应条件的选择,pcr条件的设置

pcr反应中不需要什么 2023-10-14 23:11 148 墨鱼

pcr反应中不需要什么

pcr反应条件的选择,pcr条件的设置

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的。3

1.模板的选择PCR反应用DNA(单、双链DNA)或RNA都可以作模板进行核酸的体外扩增。若起始材料是RNA,须先通过逆转录得到cDNA后才能进行正常PCR扩增。核酸标本来源PCR技术操作简便，特异性强，敏感度极高，正因为敏感度高，很容易受其他因素的影响，因此要得到准确可靠的反应结果，需根据不同的模板，摸索最适合的条件，配制出P

⊙０⊙ (在10μlqpcr反应体系，则终浓度为10μMx0.2μl/10μl=0.2μM,是通常使用的终浓度，也可以在0.1-1.0μM范围内调整。除内参外，一般50μl目的基因工作液足够做完qpPCR反应体系与反应条件--- 标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液10ul 4种dNTP混合物各200umol/L 引物各10～100pmol 模板DNA0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L

˙△˙ PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合.PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸

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