qpcr结果一片空白,做qpcr需要注意什么

qpcr异常结果分析 2023-02-13 18:24 866 墨鱼

qpcr异常结果分析

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一、通用报错(多款机型软件均可能出现) 1. 打开数据分析软件报错：java.lang.IIIegalArgumentException: One of the raw spectra is null。点击OK接受后，扩增曲线是空白(如图stepon一、普通PCR常见问题Q1:PCR产物出现假阳性(即空白对照出现目的扩增产物) Answer: 1、引物设计不合适：扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可扩增出非靶序列的序列；靶序列太短或

对于qPCR方法来说，需要设置阴性对照，阳性对照，空白对照，在阴性对照和空白对照无Ct值，阳性对照有效扩增的情况下，方才认定专属性成立；2、准确度Accuracy 准确度是指用该方法测定的结1. 可能是由于模板量过高而导致PCR结果产生了高分子量的DNA胶状物。建议将第一链cDNA浓度稀释至100倍再进行二次扩增。2. 在二次PCR时，使用的退火温度如果比引

1.重复性很差造成qPCR实验重复性差的原因有以下几点：① 移液枪不准，加样不准确这种情况下，我们可以更换性能更好的移液枪，扩大反应体积，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中2)qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。3)扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或优化引物，扩增产物长度///好

1。体系配方不对。2。试剂过期/储存温度不对导致失效。3。模板不足或过多/杂质过多4。电泳胶荧光剂1.结合NTC和NRC结果确认污染情况，建议从水，引物，酶和环境等逐一排除污染。2.建议用新的试剂做对比实验。3.建议定期进行仪器校准保养。4.需确认对应仪器对耗材的要求。熔

一、前期保姆式准备，实验期间有备无患！1.实验仪器：移液枪、qPCR 仪要定期校准（较准周期一般是11)模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。2)qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。3)扩增产物过长

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