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pcr目的条带很淡的原因 |
pcr内参和目的CT值差不多,pcr中ct差值越高
PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtime PCR的引物因为可能提取RNA时所用的样品是相同的,所以CT值差10以内属正常现象,荧光定量PCR的目的基因与内参的ct值比较相差多少.既然你半需要定量就把内参校正好了,而且表达水
有一次也测过RNA,浓度有700 ng/ml左右,但没做PCR。0 a-do34 提交于2017-05-06 02:05:27 Mis願real time RT-PCR,测了模板cDNA浓度1800ng/ml,纯度在1.96左右友友们!新手自学pcr,跑出来目的基因在20左右,内参基因都在7左右,数值差距倒是不大,这样能算吗?这样的数值可以用吗?
分析测试,百科网,定量PCR目的基因与内参的Ct值差异大怎么解决,量PCR目的基因与内参的Ct值差异大怎么解决实时荧光定量PCR技术用于检测插入的外源基因拷贝数自荧光定量pcr通过以内参基因作为标准进行相对定量,即众所周知的2–ΔΔCT 法,(前提是要求在所有测试样本中恒定表达的已知参照基因,而且表达水平不受研究条件及
在相对定量中,Ct值一般控制在15-25之间比较好,如果在绝对定量中,对低拷贝数的样品,Ct值会增大,但是一般不宜超过40循环,否则定量不准确。因此,判断Ct值出现过晚是否属于非正常情Ct值最大的意义就是用来计算目的基因的表达量,此时就有两个概念容易被提及,那就是绝对定量和相对定量,绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目,即通常所说的拷贝数。相对定
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量根据260 nm/280 nm 吸光度比值确定RNA 的纯度,吸光值在1.8~2.0 时说明RNA 质量较好。
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