qpcr曲线异常,做qpcr的ct值30左右能不能用

qpcr曲线异常,做qpcr的ct值30左右能不能用

qPCR 曲线异常问题通常分为两大类：扩增曲线异常、融解曲线异常。扩增曲线异常这个问题可能涉及到多种原因，主要可以归结为以下6 种：(1)扩增曲线不光滑主要由于整板其他孔位曲线没有异常情况出现，怀疑可能该孔位溶液有气泡影响：气泡可以让光路发生折射，因此在气泡破掉的时候会导致荧光信号发生急剧的变化，干扰仪器对荧光信号的采集。03

异常曲线1：PCR扩增抑制原因分析：H07存在扩增抑制解决⽅案：将样本稀释后进⾏扩增（抑制物的影响可通过稀释样本消除）异常曲线2：⾃动基线设置问题问原因分析：⾃动基线异常的扩增曲线包括Ct值偏大、无平台期、平台期下降等问题。1模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。2qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议

每一个荧光定量PCR(qPCR)人都有一部科研血泪史，其中，曲线异常令许多科研小白头疼不已。一般而言，qPCR 曲线异常问题通常分为两大类：扩增曲线异常、融解曲线异常。今天，将为大家总可能是样本本身存在过多抑制剂：结构蛋白、脂肪、多糖等，也有可能是模板提取试剂残留：乙醇、蛋白酶K、苯酚等，如下图H07扩增曲线存在扩增抑制，这种情况可以重新提取样本或者将样本稀

另外，也有可能是qPCR 扩增效率低或者没有扩增，体系里边只有引物纠缠成的二聚体了。总之，产物长度建议大家还是设置在100 - 200 bp,不要太短了。看了上述qPCR 曲线异常的原因，异常曲线6:山域型曲线原因分析：严重的蒸发会呈现先上升后下降的曲线，轻微的蒸发会是一种缓慢的上升，这两类异常的曲线可以看一下检测后的反应管液面是否有下

如个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡，由于温度升高后气泡破裂，使仪器检测到的荧光值突然降低所致。解决方案：进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有由于整板其他孔位曲线没有异常情况出现，怀疑可能该孔位溶液有气泡影响：气泡可以让光路发生折射，因此在气泡破掉的时候会导致荧光信号发生急剧的变化，干扰仪器对荧光信号的采集。3