奇怪的pcr扩增曲线,正常qpcr扩增曲线

pcr曲线分析 2023-11-29 23:28 583 墨鱼

pcr曲线分析

奇怪的pcr扩增曲线,正常qpcr扩增曲线

pcr(qpcr)人都有一部科研血泪史，其中，曲线异常令许多科研小白头疼不已。一般而言，qpcr 曲线异常问题通常分为两大类：扩增曲线异常、融解曲线异常。今天，将为一、正常状态扩增曲线正常PCR扩增曲线呈“S”型，分为基线期、指数期、线性期、平台期。扩增曲线良好的指标是曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，基线平而无上

?ω? 看错了，可能是把扩增曲线里的阴性对照或空白对照和熔解曲线里的实验组看混了。（说实话我不太清楚仪器5.扩增曲线杂乱无规律可能是ROX浓度和机型不匹配，建议调整ROX浓度，调整后见下图。【注】可以在仪器上将参比染料设置由ROX更改为NONE,取消ROX的校正功能，查看扩增曲线是否恢复正常，

📌 PCR 进阶：提高反转录的灵敏度一、扩增曲线异常(1)扩增曲线不光滑(图片来源于：丁香实验平台) 主要有两个原因：一是扩增信号太弱，经系统矫正后产生斜线，二是仪器本身的问题，可能1.DNA聚合酶过多或酶活性差。2.dNTP和Mg离子浓度过高。3.退火温度过低，PCR循环数偏多。4.模板DNA用

所以如过我们做的PCR扩增的特异性好，那么熔解曲线他就呈现为单峰图。一旦出现非特异性产物，熔解曲线就不是单峰了。以上是两种常见的双峰图，左边是发生了非特异性扩增，就是扩增出了PCR原理因此，在引物、模板、缓冲液、酶等都充足的理想状态下，荧光定量PCR的扩增曲线应该是这样的：理想状态下的扩增曲线然而，理想很疯狂，现实却很“性感”，看下面的“S型”曲线就

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