pcr扩增引物设计原则,pcr技术引物延伸方向

pcr扩增引物设计原则,pcr技术引物延伸方向

PCR的设计原则包括以下几个方面。1. 引物设计原则PCR的引物是扩增特定DNA序列所必需的。引物应具有以下特点：(1)引物长度应在18-30个碱基对之间，通常选择20个碱基对；(2)引一、PCR引物设计原则1、引物长度一般在15-30bp 引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不应大于38bp,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应；2、引物

引物之间不能有连续4个碱基的互补.引物5'端可以修饰. 引物3'端不可修饰.引物3'端要避开密码子的第3位.PCR引物设计的目的是找到一对适宜的核甘酸片段，使其能有PCR引物设计的几个原则了解一下，PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不

设计PCR引物的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。根据多年来的实践经验，引物的设计有一些大家都认可的原则。引物设计有3条基本原则：首先引它的原则主要是在模板cDNA的传统区域内设计方案、引物长短一般在15~30碱基中间、引物GC成分在40%~60%中间，Tm 值最好是贴近72℃、引物3′端要绕开密码子的第3位、引物3′端不可以

如果扩增的是已知的基因或序列，应避免选择含有重复序列或低复杂度序列的区域。引物浓度：一般为0.1~1 μM，以最低引物量产生所需结果为好。引物浓度过高会引起错配和非特异性扩增引物设计要点(5) 退火温度高，扩增特异性强；退火温度低，扩增效率高。原因是：如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加；如果碱基数较多，那么可以适当减

＼　＿　／ 两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补，以免形成引物二聚体；4.引物的碱基组成应平衡，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积；5.PCR扩增中的退火温度是根据引物的Tm值而决定的，两条引首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。具体实现这3条基本原则需要考虑