菌落PCR体系,菌落pcr目的

菌落pcr引物选择 2023-10-15 17:42 333 墨鱼

菌落pcr引物选择

菌落PCR体系,菌落pcr目的

菌落PCR直接以单个菌作为模板，是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落。操作简单，快捷、五、注意事项①菌落PCR时，加入菌液模板的体积不能过大，否则会影响PCR体系，导致扩增失败，般取1~2l做25l的PCR体系，模板如果太多了，引物就不够用了，显然扩增不出

2. 菌落PCR反应配置好PCR反应的反应体系，把配好的反应液加到96孔反应板中，用排枪加2.5μL的菌液到其中，注意在96孔反应板上做好标记。把96孔反应板放在PCR仪体系是相同的菌液PCR一般20ul体系加1ul 菌落PCR建议先挑单克隆溶于10ul无菌水中，取一半作为模板扩增，另一半可以作为菌种保留，如果PCR鉴定正确，再拿出来接种摇

菌落PCR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于，菌落pcr直接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含有目的gene的阳性菌落的方法。⭐标准🌿作方法：1.用高压🔥菌的牙签或枪菌落PCR步骤●菌落PCR步骤1、PCR扩增的DNA模板用无菌牙签挑取单个菌落到0.2 mL PCR管中，加入10μL无菌1×TE缓冲液混匀(可用戴手套的手指弹击离心管),标记，盖紧，100℃煮沸5

⑤电泳，观察结果，对阳性的结果相对应的主平板上的菌落保种或者进行测序。五、注意事项①菌落PCR时，加入菌液模板的体积不能过大，否则会影响PCR体系，导致扩增直接挑取菌落进行PCR,PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。实验材料菌落样品试剂、试剂盒dNTPPCR混合液仪器、耗材PCR仪实验步骤1. PCR混合液

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