pcr扩增曲线起点很高,pcr扩增曲线没有上升

pcr扩增曲线起点很高,pcr扩增曲线没有上升

6、扩增曲线压低原因分析① 模板浓度太高；② 试剂问题，限制PCR反应速率和性能。解决方案① 稀释模板，重新扩增；② 检查试剂，更换新试剂，双试剂检测。7、扩增曲线前边下降，后出现这种情况可以采取手动调整基线的方法，重新定义基线即可正常，即将基线起点改为荧光信号稳定的循环数(一般是3),基线终点要改成扩增曲线起峰的前一个循环数(比如起峰是在第25个循

(-__-)b 耗材对于荧光定量PCR来说比较重要，很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括：1）错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差，确定耗材及仪器配件是否使用正确耗材对于荧光定量pcr来说比较重要，很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括：1)错误使用成普通pcr仪器所对应的耗材

2、三步法改为两步法，退火延伸设置为一步，大部分的温度为60度，这个只是建议，具体看你买的试剂的说明书，会有具体的说明。3、很有可能有非特异性扩增，自己排查下荧光定量PCR是通过检测并记录反应体系中荧光信号的变化来实时监测整个PCR进程，这就不得不来说一说荧光定量PCR中的三大曲线：扩增曲线、熔解曲线、标准曲线。首先简单了解一下荧光定

扩增曲线的横坐标代表扩增循环系数(Cycle),纵坐标代表荧光强度。正常的扩增曲线是比较平滑的S型曲线。典型的扩增曲线分为基线期、指数增长期、线性增长期、平台期四个阶段。基线(ba提取的rna A260/280数值正常，逆转录时因不熟悉用量，用了试剂盒允许的最大rna剂量2ug.之后使用原液0.8ul和上下游引物各0.4ul配置20ul体系进行扩增，但扩增曲线起点高，熔解曲线也是起点高，下降后出现

4. 反应体系中可能有PCR反应抑制物：建议将模板梯度稀释后加入反应体系，或者重新制备纯度更高的模板。三.扩增曲线末尾起跳，但没有完整扩增1. 可能存在污染：建如图所示，标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准，不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关，更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来