扩增曲线一开始就很高,扩增曲线怎么看

扩增曲线平台期不一致的原因 2023-10-16 11:10 433 墨鱼

扩增曲线平台期不一致的原因

扩增曲线一开始就很高,扩增曲线怎么看

很怪，我的板子扩增曲线有的基线期很高，初始荧光信号是负数，然后整体不太呈S形。数据孔重复性倒还好。第一板第二板忘了是其探针浓度过高；体系中有荧光物质污染；扩增效率低

其次要观察扩增完的试剂体积，如果在扩增过程中有试剂的蒸发，可能会引起扩增曲线抬升现象，如果实验体系中加入了ROX作为参比荧光，ROX荧光可以区分扩增曲线抬升是真扩增，还是蒸发。比1. 扩增曲线无法达到平台期原因分析：基因丰度较低。解决方法：增加循环数或者增加上样的模板量，或选择适用于低丰度模板的试剂盒。2. 扩增曲线平台期下降原因分析：模板量过高及基

╯０╰ 同样也有扩增效率超过100%的情况，普通认为90~110%的扩增效率比较合适。你的扩增效率过高，你需要在引物2、三步法改为两步法，退火延伸设置为一步，大部分的温度为60度，这个只是建议，具体看你买的试剂的说明书，会有具体的说明。3、很有可能有非特异性扩增，自己排查下

起点过高，可能是由于软件在进行基线自动扣除的时候出现错误，引起了扩增曲线抬升。建议手动调整基线，即可正常whilt-shirt 2022-10-21 有帮助有可能是试剂的原因，建议安装试剂说明书重新设定程序异常扩增曲线分析1、单基因翘尾且Ct值较大或单基因翘尾无Ct值，如下图。原因分析：①人为原因：操作不规范导致交叉污染，比如存在阳性质控、阳性标本残夜或者气溶胶通过加样枪、脏手

∪ω∪ 你可以先看一看这组数据的溶解曲线，就可以排除是不是有引物二聚体或者非特异扩增。如果溶解曲线也正常实时荧光RT-PCR扩增曲线主要分为线性基线期、指数扩增初期、指数期、平台期，在线性基线期时由于为PCR扩增的起始阶段，扩增产物很少，所产生的荧光信号值较低，此

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