做菌液pcr需要摇菌几个小时,菌液pcr体系

做菌液pcr需要摇菌几个小时,菌液pcr体系

用牙签的尖部接触转化的平板培养基上的一个白色菌落，然后将牙签放入盛有3ml LB(含50mg/ml Amp)的摇菌管中。用此法随机取3个白色菌落，分别装入3个摇菌管中。3) 37℃摇菌过夜约100个左右，我用的是直径6cm的板子，所以仍显较多，我是先挑半个克隆并标记好行PCR鉴定后再对另外的一半进行摇菌抽提质粒),较难挑克隆，所以铺皿时不用离心，直接用100微升的铺

37°C 200rpm摇床摇2-4小时以上(通常赶时间的话我就在摇后3小时做，这时我的PCR循环数就要相应多些，设置为32-35个循环，若不赶时间的话，我都是取摇过夜的活化菌做模板，此时我的PCR循环数就相应少(通常赶时间的话我就在摇后3小时做，这时我的PCR循环数就要相应多些，设置为32-35个循环，若不赶时间的话，我都是取摇过夜的活化菌做模板，此时我的PCR循环数就相应少些，一般28-30个循

2、转染：16小时后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA,每个样品设置6个复孔。1) 配制DNA和转染试剂：96孔板转染质粒时每孔比例Firefly:Renilla:转染试剂=0.1μg:0.01μg:0.25μl; 2) 配制RNA和转染试感受态细菌转化后在氨苄板上培养12个小时，板上长出菌了，挑取单菌落，加AMP+摇菌，但是菌液PCR后跑胶的结果并没有看到目的基因的带(2000bp),只有一条1000的带。感受态细菌转

第五章测序1.挑的菌能摇出来，菌落PCR的条带符合目的条带，但是菌液测序失败是什么原因？2.菌液测序显示信号弱是什么原因，能测得出来吗？如果测出来的序列是成功的，菌液能不能用？3不可以。菌液PCR鉴定取你摇好的菌液就可以，由于菌液PCR里面有小的质粒小抽，需要摇10个小时以上，低于10个小时是不行的，更别说5小时了。

6⃣️A放入37度摇床3小时(之后可以暂时放4度等PCR鉴定结果) 7⃣️B进行PCR 及琼脂糖核酸电泳鉴定这个方法的好处就是：[向右R]比较节省时间，你可以上午挑菌，下午傍晚就可以摇菌直步骤大体是这样的：载体用两种酶做酶切，酶切后跑电泳胶回收，大概是10kb，目的片段是PCR扩出来的，