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pcr扩增后电泳无条带的原因 |
pcr没有扩增曲线的原因,PCR的扩增曲线的意义及解读
7、扩增曲线扩增不完整,如下图。原因分析:①人为原因:加样量不准确导致扩增效率低,配制试剂没有充分混匀或分装不均匀。②标本原因:标本病毒量太低或标本存在抑制成分。③仪器原主要有两个原因:一是扩增信号太弱,经系统矫正后产生斜线,二是仪器本身的问题,可能在扩增过程中仪器出现了波动或者本身该检测孔出现了异常。2)扩增曲线断裂或下滑(图片来源于:丁
∩﹏∩ 说明扩增失败。常见原因如下:(1)定量试剂质量较差;(2)模板质量太差;(3)引物质量太差;(4)PCR扩增时反应程序的设置有问题。PCR实验结果中有曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增的现象。原因分析:(1)阴参曲线末尾起跳,通常表示存在污染;(2)复检样本,排除非特异性扩增的可能性;(3)正
≥0≤ 不用担心,小V帮你找原因。1、扩增曲线形状异常a、扩增曲线不光滑:信号太弱,经系统矫正后产生。提高模板浓度重复实验。、扩增曲线断裂或下滑:模板浓度较高,基线的终点值2.3.2常见原因:样本中可能存在干扰物质、提取纯化不完全、pcr仪热盖出现异常等。2.3.3解决方案:复测;重新提取,或使用不同试剂盒提取。2.4案例4 2.4.1现象:不规则的扩增曲线(见
遇到扩增曲线异常,比如“S”型曲线等等情况,有可能是以下环节存在问题:1、模板的浓度太高或者降解;2、荧光染料的降解;3、在操作荧光定量PCR时,带上新的一次性手套,盖上避耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括:1)错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差,
一般扩增曲线是应该有的,如果没有:1、扩展失败,应调整反应条件和体系。建议:把你做的qPCR板不要丢了,拿去做一个普通凝胶电泳,看看有没有条带。2、荧光收集失败其次由于你说的信息比较少,不知道你是否有些因素没有考虑。比如qPCR是否用了不依赖探针的染料法,引物
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标签: PCR的扩增曲线的意义及解读
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