PCR反应扩增不出DNA条带,PCR扩增过程注意事项

为什么菌落pcr总是p不出条带 2023-06-04 17:25 298 墨鱼

为什么菌落pcr总是p不出条带

PCR反应扩增不出DNA条带,PCR扩增过程注意事项

可能有很多原因，最常见的原因是1.模板不干净，2.引物设计不当，3.退火温度过高，等等0 pcr扩增互联网喜欢作者我要约稿3引物浓度要合适，太多容易形成大量引物二聚体4可以尝试提纯DNA后PCR

1)先设计CDS区的引物F2/R2扩增，再使用这个PCR产物作为模板，使用带酶切位点(蓝色为酶切位点及保护碱基序列)的引物F1/R1进行扩增。如图：2)改变所用的酶切位点。2)换连接方法。如果使2.模板，一般来讲通过试剂盒提取的DNA质量都是可以保证的，也能在4℃冰箱放置较长的时间，仍能进行PCR扩增。要是通过煮沸法粗提的DNA就没办法放置太长时间了。一

(#｀′)凸不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。5 PCR常见问题5.1假阴性，有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。靶序列

5.退火温度：一般55℃就可以的，我的建议是，当你确定前四条都没有问题的时候，再去考虑退火温度的问题，可以选择降落PCR来确定最佳的退火温度6.酶的选择：对于选不出现扩增条带，问题与解决如下：PCR反应的关键环节有：1模板核酸的制备，2缓冲溶液，3.酶的质量，4.引物的质量与特异性，5.Mg2+浓度，6.反应体积的改变，7.物理原因，8.靶序列变异。

而PCR扩增对模板的量也是有一个比较合适范围的，你可以分别用师兄师姐给的确定能P出来的质粒和基因组DN一整个大无语，跑胶还是没条带！实验女王重演翻车现场！聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学的基础实验技术之一，但如果忽略了其中的一些要点，即使是实验室里的大神，也会遇到目的序列扩增

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标签： PCR扩增过程注意事项