PCR各种异常扩增曲线,pcr扩增曲线开始往下走

PCR各种异常扩增曲线,pcr扩增曲线开始往下走

ˋ＾ˊ〉-# 异常曲线1：PCR扩增抑制原因分析：H07存在扩增抑制解决方案：将样本稀释后进行扩增（抑制物的影响可通过稀释样本消除）异常曲线2：自动基线设置问题原因分析：自动基线问题解决正常PCR扩增曲线呈“S”型，分为基线期、指数期、平台期。扩增曲线良好的指标是曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，基线平而无上扬现象。理论上，PCR每个循环后扩增产物量即增加一倍

反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法。反应体系中有PCR反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。6、扩增曲正常PCR扩增曲线呈“S”型，分为基线期、指数期、平台期。扩增曲线良好的指标是曲线拐点清楚，扩增曲线整体平⾏性好，基线平⽽⽆上扬现象。理论上，PCR每个循环后扩增产物量

1. 熔解曲线出现多峰较为理想的熔解曲线是单峰曲线非特异性扩增引物设计不够优化：根据设计原则设计新的引物。可通过梯度PCR对引物退火温度进行优化；出现引物二聚体引物设qPCR 曲线异常问题通常分为两大类：扩增曲线异常、融解曲线异常。扩增曲线异常这个问题可能涉及到多种原因，主要可以归结为以下6 种：1)扩增曲线不光滑主要有两个原因，一是扩增信号太弱，经系统矫正

异常曲线1:PCR扩增抑制原因分析：H07存在扩增抑制解决方案：将样本稀释后进行扩增(抑制物的影响可通过稀释样本消除)异常曲线2:自动基线设置问题原因分析：自动基线问题解异常曲线4:斜直线型扩增曲线PCR实验首次检测呈斜直线型扩增曲线，再次复检后结果基本均为正常阴性。原因分析：分液不准确，检查检测后的反应管可发现管内的PCR

📌 PCR 进阶：提高反转录的灵敏度一、扩增曲线异常(1)扩增曲线不光滑(图片来源于：丁香实验平台) 主要有两个原因：一是扩增信号太弱，经系统矫正后产生斜线，二是仪器本身的问题，可确定耗材及仪器配件是否使用正确耗材对于荧光定量pcr来说比较重要，很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括：1)错误使用成普通pcr仪器所对应的耗材