qpcr没有溶解曲线怎么办,荧光定量有ct值没有溶解曲线

qpcr没有溶解曲线怎么办,荧光定量有ct值没有溶解曲线

上图这种情况就是非特异性扩增，可能是引物特异性不好引起的，也可能是空气中有气溶胶污染所导致。大家可以先增加退火温度再试试看，如果没有改善，那么就需要重新更换引物啦。为了避qPCR常见问题及解决方案如何判断qPCR 数据有效性通常需要结合扩增曲线，溶解曲线，标准曲线来进行综合分析。扩增曲线应呈现出平滑的S型曲线，起始无扩增，起峰时间正常，能达到平台

如果扩增片段过短(小于80bp),那么仅通过融解曲线就很难区分引物二聚/目的条带。另外，也有可能是qPCR 扩增效率低或者没有扩增，体系里边只有引物纠缠成的二聚体了。总之，产物长度通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green

可能是熔解程序设置错误，未搜集荧光信号，建议重新实验，增加熔解曲线阶段的信号搜集。5.熔解曲线峰型杂乱1)反应体系污染，结合NTC和NRC结果确认污染情况，建议从水，引物，酶和环境等逐设置qPCR程序时，你是否忘了设置熔解曲线程序？因为即使没有主峰，只要设置了熔解曲线程序，最后也会有一

可能是熔解程序设置错误，未搜集荧光信号，建议重新实验，增加熔解曲线阶段的信号搜集。6.两种试剂平行对比，同一产物Tm值不同可能是不同试剂的促解链成分或含通常来讲，real-time qPCR 的反应程序不需要像常规的PCR 那样，要变性、退火、延伸3 步。由于其产物长度在80～150 bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。S

●０● 可能的原因：仪器默认基线期范围较小，可手动将基线范围调大，扩增曲线即恢复正常。熔解曲线相关问题➣ (1)有扩增曲线无溶解曲线可能的原因：可在「Run Method5、溶解曲线不⽌⼀个主峰引物设计不够优化：应避免引物⼆聚体和发夹结构的出现。引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配⽐。镁离⼦浓度过⾼：适当降低