qpcr模板浓度太高,pcr时模板浓度过高

qpcr模板浓度太高,pcr时模板浓度过高

◆ 模板浓度太高，基线的终点值大于CT值：手动设置减小基线终点值，重新分析数据，默认的基线范围一般是3~15个循环，如果遇到扩增在10个循环就起来的那么收到把基线范围设置到3~5就可以了，或者是CT值由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板

•模板浓度太高：增加模板稀释倍数。12. 反应结束无扩增曲线出现•扩增效率问题：电泳检测qPCR 反应产物，观察是否有目的条带的出现。如果没有，则需要逐一排（2）扩增曲线断裂或下滑比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就

可能原因：模板浓度太低；循环数太少；试剂扩增效率低。解决方案：提高模板量；提高循环数；用标准曲线测定扩增效率，提高镁离子浓度，换用扩增效率高的试剂。3. 荧光下降可能原因：存由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400m

出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差可能导致出现抑制PCR反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。解决方案：① 起始模板量浓度越高，Ct值越小；起始模板量浓度越低，Ct值越大。2.扩增曲线、荧光阈值与一定产物量qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现，也就是扩增曲线。在PCR早期，扩增处于理想情况下，循环

由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴