pcr阳性对照失败的原因,pcr强阳性抑制原因

pcr阳性对照失败的原因,pcr强阳性抑制原因

一、模板质量问题：1)模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑个电泳看看提取的DNA,PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是原因3.1:酶。建议：条带弱的情况加多酶量，一半都能得到改善。实验表明，PCR酶对DNA具有一定的偏好性，如果使用一种酶经过优化也难以获得理想扩增时，可以尝试别的PCR酶。原因3.2:模板

2.5.2常见原因：该孔有异物；温度或荧光信号采集异常；该检测的反应体系中存在抑制物；提取核酸失败；样本采集不合格；样本/核酸漏加。2.5.3解决方案：打开PCR仪盖，查看孔内是否有异物，假分析测试，百科网，pcr阳性对照不出条带的原因，性对照不出的原因很多，主要考虑试剂系统。包括Taq酶活性、引物设计、Mg离子含量、dNTP浓度。还可考虑模板DNA的提

pcr阳性对照不出条带的原因阳性对照不出的原因很多，主要考虑试剂系统。包括Taq酶活性、引物设计、Mg离子含量、dNTP浓度。还可考虑模板DNA的提取方法，甚至你的①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃min足以使模板DNA变性，若低于93℃则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶

PCR 反应结束后，测量对照DNA 条带大小可表明扩增是否成功，这也不能排除技术性原因导致的失败。假设阴性对照可验证引物，但又增加了污染的可能性，引物对照也增加[一R]PCR产物出现假阳性(即空白对照出现目的扩增产物) - 引物设计不合适：扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可扩增出非靶序列的序列；靶序列太短或引物太短，可导致假阳性。此时

变性温度低，解链不完整是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃ 1min足以使模板DNA变性，若低于93℃则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的造成假阴性的原因可以通过设置试验对照来查找。试验对照包括：1、DNA阳性对照：以含有目的片段的DNA(或质粒〕作为模板进展扩增，证明PCR试剂是否有效、扩增过程是否正确及待测