pcr扩增不了条带,为什么pcr条带很暗

pcr扩增条带长度 2023-10-14 11:22 625 墨鱼

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pcr扩增不了条带,为什么pcr条带很暗

一整个大无语，跑胶还是没条带！实验女王重演翻车现场！聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学的基础实验技术之一，但如果忽略了其中的一些要点，即使是实验室里的大神，也会遇到目的序列扩增做个对照，如果酶没有问题的话.那可以降低一下退火温度或者稍微提高一下模板量再试试.

[三R]非特异性条带扩增或者条带出现拖尾现象- 当引物特异性差或引物形成二聚体时，可重新设计引物或者使用巣式PCR 若模板或引物浓度过高，可适当降低模板或引物浓度酶量过多，则适当PCR常见问题及解决方案[5] 1. 无扩增条带模板中含有DNA聚合酶酶抑制剂，或者模板中蛋白质没有消化除净，抑制或干扰PCR扩增过程。应检测模板的纯度和完整性，重新提取高质量模板。DN

引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR 失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效引物，是进行PCR 实验的必备条件。其特异性的问题可通过「BLAST」搞定，让人比较头痛的是引物可以形成「发夹结构」或「二聚体」即在<75℃ 时出现溶解曲线的峰),影响扩增效率，最终导

无法判定扩增出来的条带到底是不是目的条带。另外这张图太干净了，不太像是DNA扩增，像另一位答主说如果实验室常年不通风，可能有气溶胶吧，挺玄学的。

不出现扩增条带，问题与解决如下：PCR反应的关键环节有：1模板核酸的制备，2缓冲溶液，3.酶的质量，4.引物的质量与特异性，5.Mg2+浓度，6.反应体积的改变，7.物理原因，8.靶序列变异。‘有些能出现条带，有些不能’可能是没有混匀。加好pcr体系各成分后要充分混匀，可以用手轻弹管壁

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