pcr溶解曲线峰值低,pcr实验反应溶解曲线

qpcr引物二聚体会起峰吗 2023-06-05 10:29 588 墨鱼

qpcr引物二聚体会起峰吗

pcr溶解曲线峰值低,pcr实验反应溶解曲线

ˇ０ˇ pcr溶解曲线的峰值太低横坐标是温度，每个温度点一个.一般从60到98度纵坐标是荧光强度的变化值(不是强度本身).一开始加热的时候，虽然荧光强度比较强，但是由于可能是样本不纯，比如残留的抑制物造成的，建议通过Nanodrop测定OD260/280检测样本的纯度，也可以通过制作标准曲线确认样本质量，必要时重新制备样本。1RNA纯度低，建议梯度加大模板稀释倍数看优化效

标准曲线ct太低绝大多数原因是样品拷贝数太高了，太高反而好解决。直接稀释上样即可。另外您怎么排除3模板浓度太低：这个大家减少稀释度重复实验就可以了，一般来说，未知浓度的样品先从最高浓度做起。模板降解：无解，请重新制备模板，重复实验吧小可怜～溶解曲线形

较低峰出现在右侧：问题分析：大片段的非特异性扩增解决方法：重新设计引物；双峰不明显：问题分析：PCR产物目的序列中GC含量不均一造成的同一产物解离稍有偏差造成，虽然扩增产物特异熔解曲线(Dissociation curve)：随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。总的DNA双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度（Tm），不同序列的DNA，Tm值不同。DN

峰值低没有关系啊，如果同一个实验不同批次的峰值有高低差异，说明实验的扩增效率不一致，其实也就是较为理想的熔解曲线是单峰曲线，如出现多峰有以下原因：1)非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通

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