qpcr溶解曲线图怎么看,荧光定量pcr溶解曲线图分析

qpcr溶解曲线图怎么看,荧光定量pcr溶解曲线图分析

⊙＾⊙ DNA 中G-C 含量越高，Tm 值越高，成正比关系。正如上面提到的，正常的样品孔溶解曲线应该是单峰的，如下图。如果出现了双峰，则要考虑是否引物设计不合理或者引物过对于荧光定量PCR 结果的判断，最直观就是看扩增曲线是否「漂亮」即扩增曲线是否符合正常标准。如果是做染料法qPCR,还需要检查熔解曲线是否符合标准。扩增曲

∩△∩ 图3 融解曲线的求导为什么中间的峰那么高？dR/dT 越大，表明荧光值变化最快。随着温度上升，达到图中Tm点时，大部分扩增出来的双链DNA解开，荧光值下降非常快。如果qPCR产物非常如下图所示，基因1 qPCR产物长度较基因2 qPCR产物短，那融解曲线表现出基因1的Tm值低于基因2的Tm值。同理，如果qPCR扩增体系不特异，出现一个非特异性扩增产物，那qPCR产物即由目的产

qpcr溶解曲线图怎么看qpcr溶解曲线图一般可以在医生的指导下进行查看，这样可以使结果更加准确。qpcr一般指的是实时荧光定量PCR,这种方法在临床上应用比较广dR/dT 越大，表明荧光值变化最快。随着温度上升，达到Tm点时，大部分产物双链DNA解开，荧光值下降非常快。如果qPCR产物非常特异，熔解曲线在80-90之间会形成一个单峰(温度和qPCR产物长

下图为融解曲线的一次曲线图：下面这张为融解曲线的负一次微分曲线，此曲线较多被用来进行分析使用：理想的融解曲线应该只有单一峰型的曲线，如果出现两个以上的峰型，说明出现了引物在做qPCR的时候，40个循环之后，都会插入一步(6):绘制溶解曲线。Fig1.PNG 结束以后会出现下面的结果Fig2.PNG RFU为荧光单位，随着温度的升高，荧光值一直在下降，表明DNA双链在变性成

如果出现了双峰则要考虑是否引物设计不合理或者引物过量引起溶解曲线出现多峰的情况qpcr结果分析举例作图提RNA、逆转录cDNA,最后qPCR。你以为这样就可以美滋滋地坐等结果技术| qPCR不正常曲线分析溶解曲线主峰左侧有峰一般考虑是引物二聚体或者短的非特异性扩增，解决手段通常有：◆ 降低引物浓度20ul体系正常参考引物用量是10uM浓度0.4ul◆ 提高退火温度梯度摸索引