qpcr溶解曲线峰形杂乱,荧光定量pcr溶解曲线图分析

qpcr溶解曲线多峰 2023-06-04 15:44 265 墨鱼

qpcr溶解曲线多峰

qpcr溶解曲线峰形杂乱,荧光定量pcr溶解曲线图分析

熔解曲线前端起杂峰【可能原因】Rox浓度与机型不匹配。【解决方案】建议取消Rox校正查看熔解曲线是否正常。调整例图如下：以上是小翌整理的染料法qPCR实验异常结果原因和解熔解曲线常用来判断qPCR结果的特异性，理想的熔解曲线为单峰，异常的熔解曲线可能会出现双峰、杂乱等情况，下面我们来逐一分析。1.熔解曲线出现双峰1)双峰，杂峰

要换引物比较麻烦，后来跑电泳没有杂质带了，只是溶解曲线还杂乱无章，一定要换引物么？除了引物有问题(2)扩增曲线断裂或下滑比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置

可能是熔解程序设置错误，未搜集荧光信号，建议重新实验，增加熔解曲线阶段的信号搜集。6.两种试剂平行对比，同一产物Tm值不同可能是不同试剂的促解链成分或含量5、熔解曲线出现双峰甚至多峰？可能原因是：引物设计不够优化--与阴性对照的熔解曲线比对可判断是引物二聚体或是非特异性扩增的影响。相应的调整引物设计，避免引物二聚体、发夹结

＞ω＜较低峰出现在右侧：问题分析：大片段的非特异性扩增解决方法：重新设计引物；双峰不明显：问题分析：PCR产物目的序列中GC含量不均一造成的同一产物解离稍有偏差造成，虽然扩增产物特异溶解曲线形状异常(1)杂峰在主峰之前，Tm 约为70 - 75℃——一般为引物二聚体这种情况主要有三个解决方法：重新设计引物；杂峰为引物二聚体，引物二聚体主要是由于体系内引物与引物

跟加cDNA的数值相差不大，熔解曲线的峰值也一样，原因是什么？同实验组的师妹的基因引物没问题，但内参有，为什么？03-17来自AndroidIP河南河南收藏回复点赞这是什么原因？qPCR mix是什么？非特异性扩增引物设计不足：根据设计原则设计新的引物，引物的退火温度可以通过梯度PCR来优化。引物二聚体由不合理的引物设计引起的熔解曲线中的引物二聚体峰通常

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