pcr失败的原因一般有哪些,pcr失败的比例

pcr失败的原因一般有哪些,pcr失败的比例

ˇ﹏ˇ 不知道为什么会出现这种情况，我采用公司的Tm值进行PCR,step1 94摄氏度5分钟一个循环，step2 94摄氏度30s,55摄氏度30s ,72 摄氏度30s,35个循环，step3 72摄氏度30min,结果没有出1、引物设计的不好，这是主要原因。引物设计原则你要稍微看下。2、反应温度选的不好，这是次要原因。尤其是退火温度选的不对。你可以做一下温度梯度PCR，选择一个

一、模板质量问题：1)模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑个电泳看看提取的DNA,PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是1)样品自身的基因型差异导致扩增失败。也就是说你的引物与某些基因型的样品结合的好，而和另一些基因型结合不好。可以换一对更保守的引物试试。祝顺利！2)普通PCRT用的一对引

实时荧光PCR 为实时检测(在对数扩增期)而不是终点检测，具有引物和探针双重特异性，灵敏度高，可对模版进行定量，无需接触EB 等有害物质，在密闭的反应管中进行，减少对环境中气溶胶我失败的原因很多，现在也是偶尔出结果。原因如下：pcr仪不是所有孔都能出结果。能出结果的孔要做标记，下次好再用。退火温度。调整了很久。我

PCR实验常见失败原因对策分析及体系优化PCR虽然为一个简单的实验，但在实际过程中可能会出现各种问题，产生问题的原因可能来源于以下几个方面，实验操作，试剂质量，PCR反应过程中各种试二、引物问题1)样品自身的基因型差异导致扩增失败。也或者电泳操作的问题。2. PCR扩增有时出现涂抹PCR失败的原因及如何改善？再当成模板扩一次怎么

（°ο°） 影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCR扩增是不会成功的。PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。原因：往往是由于酶量过多或酶的质量差、dNTP浓度过高、Mg2+浓度过高、退火温度过低、或循环次数过多及引物不特异等引起的。建议：减少