pcr阳性对照跑不出来,pcr酶加少了有影响吗

pcr有目的条带但是很暗 2023-10-13 22:15 146 墨鱼

pcr有目的条带但是很暗

pcr阳性对照跑不出来,pcr酶加少了有影响吗

做菌落PCR没有跑出阳性对照，另一小伙伴就是退火温度提高了0.5度，而且质粒的加量增加了0.1ul，其他空白对照需要1支变性剂，每个阳性对照需要2支变性剂。2.5.3分别加入对应PCR产物2.5μL。混匀，室温放置10min。2.5.4加入杂交液，充分混匀。阴性对照样本、供试品检测、空白样本、阳

啥也没跑出来🤑)2.隔管加样(八连管)3.更换、分装primer4.跑PCR前仔细消毒仪器5.提高/降低Tm6.调整cycle(考虑到即使有污染，阴性对照的模版肯定会比阳性对照要少，所以一般是选择降低c阳性对照不出的原因很多，主要考虑试剂系统。包括Taq酶活性、引物设计、Mg离子含量、dNTP浓度。还可考虑模板DNA的提取方法，甚至你的引物是否正确稀释。

聚合酶链式反应(PCR) ExperimentQCategory,PCR阴性对照也跑出阳性条带，想不出到底哪里污染了。图1是第一次做的正常的结果，图2是过了一个月再测下一批小鼠(不是你说跑出来不是想要的条带，可能是没有切开。另外，你给的信息太少了，不好分析。

首先是操作上，加样先加阴性对照后加实验组，阴性对照体系配完就盖上密封好，最后再加阳性对照。枪头不要混用，加样过程中枪头也不要频繁地经过PCR管的上方。简单地说操作规范一般就问没道理产物下不来，所以考虑是蛋白污染，点样孔会亮；这样的话就是扩增失败了，需要调整PCR扩增体系或者

心态已崩，跑了三轮了什么都没有阳性对照也没有条带，什么都换了一遍还是没有条带同实验室的其他同学也出现了这种情况，但是还找不到原因有朋友能够提供一点改进思路吗？#PCR #研究阳性对照不出的原因很多，主要考虑试剂系统。包括Taq酶活性、引物设计、Mg离子含量、dNTP浓度。还可考虑模板DNA的提取方法，甚至你的引物是否正确稀释。阅读全

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