PCR各种异常扩增曲线图片,荧光定量pcr异常曲线

PCR各种异常扩增曲线图片,荧光定量pcr异常曲线

📌 PCR 进阶：提高反转录的灵敏度一、扩增曲线异常(1)扩增曲线不光滑(图片来源于：丁香实验平台) 主要有两个原因：一是扩增信号太弱，经系统矫正后产生斜线，二是仪器本身的问题，可通过对PCR过程中荧光信号的实时监测，荧光强度的变化趋势，呈现出一条S型曲线即“扩增曲线（Amplication

∪▂∪ 1.1 使用普通PCR仪器所用耗材普通耗材一般透光度比较差，会造成荧光扩增曲线异常，比如打折的扩增曲线。1.2 使用质量较差的耗材质量较差耗材可能会引起荧光值不稳定，这会造成反应1)非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度PCR 对引物退火温度(Tm值)进行优化，上调Tm值，选购质量较好的离心柱法核

1、首先我们看一下PCR正常扩增曲线，是比较平滑的S型曲线，见下图：2、常见异常结果分析2.1 案例1 2.1.1现象：常见单基因翘尾且出现较大的Ct值和单基因翘尾无Ct值现象，见下图：2.1.2 （2）如果只是想看看扩增效率（E）（E=10-1/斜率），检验PCR的反应体系是否符合要求，我们有时候也采⽤待测试样品作为标准品，逐步稀释后进⾏反应，最终看标准曲线的斜率和R2

扩增曲线在前几个循环出现了信号明显波动情况，然后趋向于稳定。02 分析：前期的PCR过程中，由于试剂和核酸样本没有得到充分的混匀，导致信号的不稳定，等反应了几个循环之后，样本和实时荧光PCR技术是新冠病毒核酸检测的主要方法。每一个标本的检测结果都会以一张扩增曲线图呈现，需要我们的“专业慧眼”去辨析，判断出“阴性”还是“阳性”。实时荧光PCR技术是新

1、首先我们看一下PCR正常扩增曲线，是比较平滑的S型曲线，见下图：2、常见异常结果分析2.1 案例1 2.1.1现象：常见单基因翘尾且出现较大的Ct值和单基因翘尾无Ct值现象，见下图：2.1.2 扩增曲线呈现为V型或是倒V形状，多见于PCR反应板四周边缘孔位。02 原因分析：该类型曲线反应孔多数会出现液面偏低情况，甚至该孔无液体(上机前检查液面正常)。可能是PCR反应板封板膜