扩增曲线起峰晚,有溶解曲线没有扩增曲线

扩增曲线起峰晚,有溶解曲线没有扩增曲线

扩增的荧光信号高于背景荧光信号，扩增曲线起峰，开始进入指数期。在指数期内，每个循环积聚的产物准确加倍(假定100%反应效率)。该阶段的PCR反应具有高度特异性和精确度。因为所有试有时扩增曲线起峰很晚，可能无法观察到平台期，甚至线性增长期。实际上，查看“S”型扩增曲线，建议还要在Multicomponent plot(多组份图谱)里查看，而非仅在Amplification plot(扩增曲

实时荧光曲线PCR曲线起峰较缓的原因。1，非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度PCR对引物退③ 探针浓度过高，体系中有荧光物质污染，扩增效率低。解决方案① 采取手动调整基线的方法，重新定义基线即可正常(即将基线起点改为荧光信号稳定的循环数，基线终点设置成扩增曲线起峰的前一个循环

通过标准曲线可以得到线性方程，将线性方程得到的斜率(K)带入扩增效率计算公式中：e=10[-1/k]-1;只有当扩增效率满足90~120%,且标准曲线R2 ≥ 0.99,引物的扩增效率才是合格的，定量出来5月开始，他们向社会招募核酸采样员与扫码辅助人员，这也成为新桥镇上的新兼职。一位曾在岗亭工作的女士说，她的同事们来处各异：保洁、物业、失业者，或者是公司

③ 探针浓度过高，体系中有荧光物质污染，扩增效率低。解决方案① 采取手动调整基线的方法，重新定义基线即可正常(即将基线起点改为荧光信号稳定的循环数，基线终点设置成扩增曲线起扩增曲线应呈现出平滑的S型曲线，起始无扩增，起峰时间正常，能达到平台期。由扩增曲线得到的Ct值是判断实验成功与否的重要参考，Ct值有一定的可信范围，一般建议，阳性结果(科研)调整到1

楼主赞过模板浓度低或者是本身表达量就低，可以结合内参Ct值适当提高模板浓度2019-01-09IP广西广西CT值是你最终需要用于计算的值，而溶解曲线是鉴定你的数据可不可用。扩增探针会影响到你的溶解曲线线形